ساخت وکتور بیانی با ویژگی تنظیم منفی پایدار مسیر تولید استات در باکتری اشریشیاکلی به وسیله‌ی آنتی‌سنسRNA

یکی از مشکلات استفاده از باکتری اشریشیاکلی برای تولید انبوه پروتئین نوترکیب، ترشح استات در محیط کشت است که سبب کاهش طول عمر باکتری و به دنبال آن کاهش بیان پروتئین نوترکیب می­شود. در این مقاله ما از فناوری RNAی آنتی­سنس به عنوان ابزاری سودمند در مهندسی متابولیک برای مهار جزئی بیان ژن­های مربوط به دو آنزیم اصلی مسیر استات، یعنی فسفوترانس­استیلاز (PTA) و استات­کیناز (ACK)، استفاده کردیم. یک پلاسمید نوترکیب که حاوی ژن­های آنتی­سنسی است که هر دو ژن ackA و pta را مورد هدف قرار می­دهد، ساخته شد. قطعات مربوط به کاست آنتی سنس در ناقل مورد نظر کلون شده و عملکرد آن با اندازه­گیری سطح mRNAی مربوط به هر دوژن با روش RT-PCR و سنجش فعالیت آنزیم­های آن هابا روش واکنش­های جفت شده براون و همکارانش مورد ارزیابی قرار گرفت. بیان کاست، سبب کاهش سطح mRNAی مربوط به هر دوژن و فعالیت آنزیم­های آن ها شد. میزان این کاهش فعالیت در مورد استات کیناز، 17 درصد در مورد فنسفوترنس استیلاز 15 درصد محاسبه شد. با مشاهده این اثر امیدهای تازه­ای برای جلوگیری از مرگ زودهنگام باکتری و افزایش بازدهی تولید داروی نوترکیب در باکتری اشریشیاکلی به وجود می­آید.